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粪便总 DNA 提取试剂盒

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粪便总 DNA 提取试剂盒:TM Fecal Total DNA Extraction Kit 采用独特的疏水膜技术,彻底去除粪便中的各种干扰物,提取高纯度的 DNA。试剂盒采用了独特的缓冲系统,可从多种不同类型的粪便样中快速提取总 DNA (包括各种类型的细菌、真菌和脱落细胞)等。

  • 产品描述

粪便总 DNA 提取试剂盒

 Fecal Total DNA Extraction Kit

(适用于从各种粪便中提取总 DNA)

 

粪便总 DNA 提取试剂盒

试剂盒组成:50 (50 次)

储存条件

本试剂盒在室温(15-25 ℃)下可保存一年。 

产品特点:

TM Fecal Total DNA Extraction Kit 采用独特的疏水膜技术,彻底去除粪便中的各种干扰物,提取高纯度的 DNA。试剂盒采用了独特的缓冲系统,可从多种不同类型的粪便样中快速提取总 DNA (包括各种类型的细菌、真菌和脱落细胞)等。

注意事项:

1.实验前准备工作:详细阅读该手册熟悉各步骤,并准备好所有的试剂盒组分、研钵、研棒、药匙、1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管以及 37 ℃和 65 ℃ 的温浴条件。

2。KSL1, KBL1 和 KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀,在 37-65 ℃温浴片刻即可。

3。Buffer KW 第一次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水或 95%乙醇。每次使用后,请立即拧紧盖子。

操作步骤:

(一)平衡吸附柱

1。取一 TM Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上(已备)。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内,室温 13 000 rpm 离心 1 min,使平衡液完全流过柱子。弃收集管中的滤液,将空柱套回收集管内。

注意:柱子不平衡,将导致 DNA 产率减少。

(二) 样品处理

2.可根据不同条件选择以下方法:

A:研磨法:

1)液氮研磨: 取 10 - 30 mg 新鲜粪便样品于研钵中,加入少量液氮, 迅速研磨,待样品磨碎,再加少量液氮,再研磨,如此三次。将样品迅速转入 2 ml 离心管,加入 600-1000 μl Buffer KSL1,65℃水浴 15 min,其间混匀 2-3 次。然后 13,000 rpm,常温离心,5 min。

2)小心将上清液转至干净的 2ml 离心管,加入 1.0-1.5 倍体积的异丙醇, 混匀, 13,000 rpm, 3 min, 离心弃去去上清; 保留沉淀。在沉淀中加入 100μl KE,彻底溶解,然后加入 1000-1500 μl KBL1,13,000 rpm, 2 min,上清液待转移。

B.微波加热法

1)取 10 - 30 mg 新鲜粪便样品于 2 ml  离心管中,加入 600-1000 μl Buffer KSL1,强烈混匀,尽量不保留大的颗粒。65℃水浴 15 min,其间混匀 2-3 次。然后 13,000 rpm,常温离心,5 min。  上清和沉淀都要备用。

2)上清液转入新的 2 ml 离心管,待用。

3)将带有沉淀的离心管放入普通微波炉,最大功率下,加热 1min;待结束后再加热另一个 1 min;然后第三个 1 min。

4)加入 600-1000 μl Buffer KSL1 于加热的离心管内,强烈混匀,65℃ 水浴 15 min,其间混匀 2-3 次。然后 13,000 rpm,常温离心,5 min. 上清备用。

5)上清转移至另一新的 2 ml 离心管。

6)在2) 和5) 的上清液中分别加入1.0-1.5 倍体积的异丙醇,混匀1 min, 常温离心 13,000 rpm, 3 min, 去上清; 保留沉淀。在沉淀中分别加入 100 μl KE 溶解。合并两个离心管的溶液。

7)加入 1000-1500 μl KBL1,混匀。一般不会出现沉淀,如有,离心弃去沉淀。

(三)吸附

3.将上清液转移到平衡过的吸附柱内,室温 13 000 rpm 离心 30 s,使裂解液完全流过柱子。弃去收集管中的过滤液,将吸附柱套回收集管中。注意:1)室温太低可能造成 KBL1 混浊或沉淀,在 37 ℃温浴片刻即可。

2)如上清液体积过大,可以分成数次上柱,每次上样量不要超过 700

μl。

4.(可选)加入 30 μl  浓度为 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上,37 ℃

放置 5-10 min。

注意:本试剂盒没有配备 RNase A 溶液。一般来说,这一步没有必要,因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有吸附能力。如果实验要求不能残留微量RNA,可采用这一步处理。

(四) 漂洗

5. 加入 700 μl Buffer KW1,室温 13 000 rpm 离心 30 s,弃去收集管中的过滤液,保留柱。

7.加入 700 μl Buffer KW,室温 13 000 rpm 离心 30 s,弃去收集管中的过滤液,保留柱。注意:Buffer KW 在首次使用之前必须加入 50 ml 无水或95%乙醇,并置于室温下保存。

8。(可选)重复用 700 μl 70%乙醇(室温)洗涤柱子,室温 13 000 rpm

离心 1 min。(注意:用 70%乙醇漂洗有利于提高 DNA 纯度)

9.弃去收集管中的滤液,将空柱套回收集管内。室温下,13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。

注意:此步骤不可省,否则将导致乙醇残留于 DNA 中,影响后续反应。(五)洗脱

10.把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上,加入 50 μl 的 KE(可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl,pH 8.0 或纯水代替,纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0),65 ℃放置 5-10 min,13 000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。(也可以将 KE 预热至 65℃,再加至膜上,可以减少放置时间至 1min)

注意:小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位,并确保液体将膜全部覆盖。

11.DNA 应保存于 4 ℃,若长时间保存,可冻存于-20 ℃。

本司部分DNA提取试剂盒,致电:020-8257 4011杨永汉

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